کالم کرومیٹوگرافی کا بنیادی اصول سٹیشنری فیز اور موبائل فیز کے لیے اجزاء کے تعلق میں فرق کی بنیاد پر مرکب کی علیحدگی ہے۔ اس میں مائع یا گیس (موبائل فیز) کو ٹھوس مواد (اسٹیشنری فیز) سے بھرے کالم سے گزرنا شامل ہے، جہاں مرکب کے مختلف اجزاء اسٹیشنری مرحلے کے ساتھ مختلف تعاملات کی وجہ سے مختلف شرحوں پر سفر کرتے ہیں۔
یہاں یہ ہے کہ یہ مزید تفصیل سے کیسے کام کرتا ہے:
اسٹیشنری مرحلہ: کالم ایک ٹھوس مواد سے بھرا ہوا ہے، جیسے سیلیکا جیل یا ایلومینا، جو مرکب کے اجزاء کے ساتھ تعامل کے لیے سطح فراہم کرتا ہے۔ علیحدگی کی نوعیت کے لحاظ سے اسٹیشنری مرحلہ قطبی یا غیر قطبی ہوسکتا ہے۔
موبائل فیز: سالوینٹس کا ایک محلول یا مرکب جو کالم کے ذریعے حرکت کرتا ہے۔ موبائل فیز اسٹیشنری فیز کے ذریعے مرکب کے اجزاء کو لے جاتا ہے۔
علیحدگی: جب مرکب کو کالم کے اوپری حصے پر لگایا جاتا ہے، تو اس کے اجزاء سٹیشنری مرحلے کے ساتھ مختلف حد تک تعامل کرتے ہیں۔ کچھ اجزاء میں سٹیشنری فیز (جذب) کی طرف ایک مضبوط کشش ہو سکتی ہے، جبکہ دیگر کا تعامل کمزور ہو سکتا ہے اور وہ کالم کے ذریعے تیزی سے آگے بڑھ سکتے ہیں۔
Elution: جیسے جیسے موبائل کا مرحلہ کالم سے گزرتا ہے، مرکب کے اجزاء اسٹیشنری مرحلے کے لیے ان کی تفریق وابستگی کی بنیاد پر الگ ہوجاتے ہیں۔ اسٹیشنری مرحلے کے ساتھ کمزور تعامل والے اجزاء تیزی سے حرکت کرتے ہیں، جبکہ مضبوط تعامل والے اجزاء سست حرکت کرتے ہیں۔
مجموعہ: الگ کیے گئے اجزاء مختلف اوقات میں کالم سے باہر نکلتے ہیں، اور انہیں الگ سے جمع کیا جا سکتا ہے۔
کالم کرومیٹوگرافی کو کیمسٹری میں مرکبات کو صاف کرنے اور الگ کرنے والے مرکبات کے لیے بڑے پیمانے پر استعمال کیا جاتا ہے۔