کالم کرومیٹوگرافی ایک ایسی تکنیک ہے جو مرکبات کو ان کی قطبیت اور اسٹیشنری اور موبائل مراحل کے ساتھ تعامل کی بنیاد پر الگ اور صاف کرنے کے لیے استعمال ہوتی ہے۔ یہاں کالم کرومیٹوگرافی کی تیاری اور انعقاد سے متعلق ایک مرحلہ وار گائیڈ ہے:
ضروری مواد:
کالم: سٹاپ کاک کے ساتھ گلاس یا پلاسٹک کا کالم۔
اسٹیشنری مرحلہ: سیلیکا جیل یا ایلومینا (اذوربینٹ)۔
موبائل مرحلہ: سالوینٹ یا سالوینٹس کا مرکب (ایلیونٹ)۔
نمونہ: الگ ہونے والا مرکب۔
پیکنگ مواد (اختیاری): روئی یا شیشے کی اون۔
بیکر یا جمع کرنے والی شیشیاں: ایلوئنٹ فریکشنز کو جمع کرنے کے لیے۔
سامان: کلیمپ اور اسٹینڈ، پائپیٹ، چمنی، اسپاٹولا۔
کالم کرومیٹوگرافی کی تیاری کے اقدامات:
جذب کرنے والا منتخب کریں:
الگ کیے جانے والے مرکبات کی قطبیت کے لحاظ سے سلکا جیل یا ایلومینا کا انتخاب کریں۔
جذب کرنے والے کے ذرہ کا سائز (40–63 µm) علیحدگی کی کارکردگی کو متاثر کرتا ہے۔
کالم تیار کریں:
کالم کے نچلے حصے کو روئی یا شیشے کی اون سے لگائیں۔
کالم کو عمودی طور پر اسٹینڈ پر بند کریں جس میں سٹاپ کاک بند ہو۔
گیلی پیکنگ (بہترین نتائج کے لیے ترجیحی):
کالم میں تھوڑی مقدار میں سالوینٹ (موبائل فیز) شامل کریں۔
سالوینٹس میں جذب کرنے والے کی ایک سلری تیار کریں (کالم کے جذب کے حجم کا 15-2 گنا استعمال کریں)۔
ایک چمنی کا استعمال کرتے ہوئے آہستہ سے کالم میں گارا ڈالیں۔
کالم کو آہستہ سے تھپتھپا کر یا اسے آرام کرنے کے ذریعے جذب کرنے والے کو حل ہونے دیں۔
اضافی سالوینٹس کو نکالنے کے لیے سٹاپ کاک کو مختصر طور پر کھولیں جب تک کہ جذب کرنے والا ایک کمپیکٹ اور لیول بیڈ نہ بنا لے۔
خشک پیکنگ (متبادل طریقہ):
خشک جاذب کو براہ راست کالم میں شامل کریں۔
یکساں پیکنگ کو یقینی بنانے کے لیے کالم کو آہستہ سے تھپتھپائیں۔
کالم کی دیواروں کے ساتھ احتیاط سے سالوینٹ شامل کریں تاکہ پیک شدہ جذب کو پریشان نہ کریں۔
کالم کی حالت:
ایک بار پیک ہو جانے کے بعد، کالم کو سالوینٹ کے ساتھ پہلے سے ایلیٹ کریں تاکہ ایئر جیبوں کو ہٹایا جا سکے اور جذب کو متوازن کیا جا سکے۔
نمونہ لوڈ کریں:
موبائل مرحلے کی تھوڑی مقدار میں نمونے کو تحلیل کریں۔
پپیٹ یا سرنج کا استعمال کرتے ہوئے نمونے کو پیک جذب کرنے والے کے اوپر آہستہ سے لگائیں۔
نمونے کو اسٹیشنری مرحلے میں جذب ہونے دیں۔
موبائل فیز شامل کریں:
جاذب بیڈ کو پریشان کیے بغیر کالم کے اوپری حصے میں احتیاط سے سالوینٹ ڈالیں۔
اخراج شروع کرنے کے لیے اسٹاپ کاک کو کھولیں، ایک مستحکم بہاؤ کی شرح کو برقرار رکھتے ہوئے۔
کسر جمع کریں:
ٹیسٹ ٹیوب یا شیشیوں کا استعمال کرتے ہوئے ترتیب وار حصوں میں ایلوٹڈ سالوینٹس کو جمع کریں۔
UV روشنی، TLC (پتلی پرت کی کرومیٹوگرافی) یا دیگر تجزیاتی طریقوں کا استعمال کرتے ہوئے حصوں کی نگرانی کریں۔
سالوینٹ سسٹم کو بہتر بنائیں:
ایک واحد سالوینٹ یا کم قطبی سالوینٹ کے ساتھ شروع کریں۔
بتدریج قطبیت میں اضافہ کریں اگر مرکبات ایلوٹ نہ ہوں۔
کامیابی کے لیے تجاویز:
ہوا کے بلبلوں سے بچیں: اس بات کو یقینی بنائیں کہ جذب کرنے والا بستر مضبوطی سے اور یکساں طور پر پیک کیا گیا ہے۔
بہاؤ کی شرح کو برقرار رکھیں: ایک مستحکم اور معتدل بہاؤ کی شرح بہتر علیحدگی فراہم کرتی ہے۔
گریڈینٹ ایلیوشن: بہتر حل کے لیے بتدریج بڑھتی ہوئی قطبیت کے ساتھ سالوینٹس کا مرکب استعمال کریں۔
پیشرفت کی نگرانی کریں: علیحدگی کی جانچ کرنے اور حصوں کی شناخت کے لیے TLC کا استعمال کریں۔
ان اقدامات پر عمل کرتے ہوئے، آپ کالم کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے مؤثر طریقے سے اپنے مرکبات کو الگ اور صاف کر سکتے ہیں۔